NTO

NTO        Limbová 14, 83303 Bratislava – Nové Mesto, Slovensko        Tel.: +421 2 22131 420    ♥    Non-stop: + 421 903 706 648       Email: kontakt.nto@nto.sk

VYŠETRENIA A ODBERY

Príjem vzoriek: počas pracovnej doby 7.00 – 15.00, mimo pracovnej doby po telefonickej dohode

1. Vyšetrenia v sérologických laboratóriách

Tel. kontabkt: 02 /22 13 14 24, prípadne koncové dvojčíslie (22,27,26), služba 0903 706 648

Transport materiálu: krv pri bežnej teplote, do 24 hodín od odberu, separované sérum v chladiacom boxe alebo zmrazené

1.1. Skríning anti-HLA protilátok I. a II. triedy

Význam vyšetrenia:
U pacientov čakajúcich na transplantáciu je určenie prítomnosti protilátok proti HLA-antigénom
ukazovateľom senzibilizácie a s ňou spojeného rizika možných imunologických komplikácií po
transplantácii.
Monitorovanie týchto protilátok po transplantácii umožňuje sledovanie dynamiky preformovaných protilátok a včasné zachytenie „de novo“ protilátok, ktoré môžu signalizovať rozvoj imunitnej reakcie proti štepu, čo umožňuje včasnú diagnostiku humorálnej rejekcie.

Indikácia vyšetrenia:
• pred zaradením na Čakaciu listinu na transplantáciu
• pred transplantáciou od mŕtveho alebo od žijúceho darcu (odber najviac 48 hodín pred operáciou)
• po transplantácii protokolárne v ¼ – ročných intervaloch
• pri zhoršení funkcie štepu po transplantácii za účelom diagnostiky humorálnej rejekcie
Požadovaný odber: zrazená krv alebo separované sérum prípadne plazma
Potreba objednania: nie
Použitá metóda: LUMINEX

1.2. Špecifikácia anti-HLA protilátok I. a II. triedy

Význam vyšetrenia:
U pacientov ktorým bola skríningovým vyšetrením zistená prítomnosť anti-HLA protilátok, je potrebná podrobná analýza ich špecificity. Na základe tejto analýzy je možné posudzovať imunologické riziko transplantácie orgánu alebo tkaniva od konkrétneho darcu v procese alokácie orgánov od mŕtvych darcov, alebo pred plánovanou transplantáciou od žijúceho darcu. V období po transplantácii toto vyšetrenie umožňuje sledovanie dynamiky preformovaných protilátok a včasné zachytenie „de novo“ protilátok namierených proti inkompatibilným HLA-antigénom darcu (donor-špecifické protilátky – DSA), ktoré signalizujú rozvoj humorálnej imunitnej reakcie proti štepu.

Indikácia vyšetrenia:
• pred zaradením na Čakaciu listinu na transplantáciu v prípade pozitívneho výsledku skríningu
• pred transplantáciou od mŕtveho alebo od žijúceho darcu v prípade pozitívnej histórie
• po transplantácii protokolárne v ¼ – ročných intervaloch v prípade pozitívneho výsledku skríningu anti-HLAprotilátok (najviac 48 hodín pred operáciou)
• pri zhoršení funkcie štepu po transplantácii za účelom diagnostiky humorálnej rejekcie
• po desenzibilizačnej liečbe pred transplantáciou alebo po liečbe humorálnej rejekcie na monitorovanie efektívnosti liečby
Požadovaný odber: zrazená krv alebo separované sérum prípadne plazma
Potreba objednania: nie (žiadanka na vyšetrenie Luminexom je v súboroch na stiahnutie)
Použitá metóda: LUMINEX

1.3. Krížová skúška pred transplantáciou

Význam vyšetrenia:
Cieľom vyšetrenia je detekcia protilátok u príjemcu namierených proti HLA-antigénom I. a/alebo II. triedy darcu (donor-špecifické protilátky – DSA), s použitým živých lymfocytov izolovaných z krvi alebo lymfatického tkaniva (mŕtvi darci). Pozitivita testu poukazuje na vysoké imunologické riziko. Vyšetrenie sa vykonáva so sérom odobratým max. 48 hodín pred výkonom transplantácie.

Indikácia vyšetrenia:
• pacient pred transplantáciou orgánu od mŕtveho darcu (najviac 48 hodín pred operáciou)
• pacient pred plánovanou transplantáciou obličky alebo krvotvorných buniek od žijúceho darcu
• pacient po transplantácií obličky od žijúceho darcu podľa klinického stavu
Požadovaný odber od príjemcu – zrazená krv, alebo separované sérum príp. plazma a od darcu 2 krát 7-8 ml čerstvej periférnej krvi odobratej do ACD alebo lymfatické tkanivo (uzlina, časť sleziny) do nádoby s fyziologickým roztokom
Potreba objednania: áno – v prípade plánovaného výkonu od žijúceho darcu, nie – v prípade mŕtveho darcu
Použitá metóda: Prietoková cytometria

2. Vyšetrenia v  laboratóriách ANALÝZY DNA

Tel. kontakt: 02 /22 13 14 25, prípadne koncové dvojčíslie (26,28,30), služba 0903 706 648

Transport vzoriek: do 72 hodín bez potreby chladenia a mrazenia, nad 72 hodín je potrebné skúmavku zmraziť a zamrazenú transportovať v termoboxe, možnosť zaslať aj poštou

2.1. Stanovenie HLA I. a II. triedy – HLA-A,B,C, DRB1, DQA1, DQB1, DPA1, DPB1, DRB3,4,5

Význam vyšetrenia:
Stanovenie HLA antigénov a kompatibilita v jednotlivých lokusoch je pri transplantácii obličiek a krvotvorných buniek (pri dodržaní kompatibility v ABO systéme) hlavným kritériom pri výbere vhodného páru darca – príjemca. Nezhoda v antigénoch spúšťa u príjemcu imunitnú odpoveď vedúcu k rejekcii. Stanovenie HLA antigénov je nevyhnutné pre stanovenie donor špecifických protilátok aj pri orgánových transplantáciách pri ktorých algoritmus výberu nie je viazaný na HLA kompatibilitu príjemcu a darcu.

Indikácia vyšetrenia:
• pacient pred zaradením na Čakaciu listinu na transplantáciu
• typizácia mŕtveho darcu za účelom výberu príjemcu z listiny čakateľov na obličky
• pacient pred plánovanou transplantáciou krvotvorných buniek za účelom vyhľadania darcu
• príbuzní resp. členovia rodiny pacienta pred plánovanou transplantáciou krvotvorných buniek za účelom vyhľadania vhodného príbuzného darcu
Požadovaný odber: 2,5ml periférnej krvi do štandardizovanej skúmavky na krvný obraz (na štítku musí byť EDTA K), prípadne tkanivo odobraté do nádoby s fyziologickým roztokom
Potreba objednania: nie
Použitá metóda: Low resolution – RT-PCR
High resolution – NanoType, SBT, NGS

Vyšetrenia mimo transplantačný program
2.2. Solitárne stanovenie HLA aliel – HLA-A,B,C, DRB1

Význam vyšetrenia:
Prítomnosť niektorých špecifických alel je silne asociovaná so zvýšeným rizikom vzniku určitých ochorení. Určenie prítomnosti/neprítomnosti určitého HLA-antigénu, ktorý sa vyznačuje zvýšenou asociáciou so sledovanou klinickou jednotkou sa uplatňuje ako pomocná diagnostika chorôb.
Niektoré HLA alely môžu predpovedať či bude mať pacient závažnú nežiadúcu reakciu na konkrétny liek alebo naopak bude bez pozitívnej odozvy na liek.

Indikácia vyšetrenia:
• pacient so suspektnou diagnózou viažucou sa k HLA B27( Bechtereva ch., reaktívna artritída), B51 (Behcetova ch.), B17 (Psoriáza), A3 (Hereditárna hemochromatóza)
• , DRB1*04:01 (reumatoidná artritída), DRB1*15:01 (Skleróza multiplex), DRB1*03:01 (Diabetes mellitus1.typu)
• Onkologický pacient pred plánovanou TCR terapiou ktorej účinnosť je viazaná na HLA- A*02:01
• HIV pozitívny pacient pred zahájením liečby Abakavirom – prítomnosť HLA-B*57:01 (hypersenzitívna reakcia)
• pacient s dnou pred zahájením liečby Allopurinolom – prítomnosť HLA-B58:01  (hypersenzitívna reakcia)
Požadovaný odber: 2,5ml periférnej krvi do štandardizovanej skúmavky na krvný obraz (na štítku musí byť EDTA K)
Potreba objednania: nie
Použitá metóda: sekvenovanie SBT, SSP

2.3. Stanovenie genetickej predispozície k celiakii

Význam vyšetrenia:
Vylúčenie diagnózy celiakie – ak pacient nemá ani jednu z rizikových alel HLA-DQ2 alebo DQ8 je diagnóza prakticky vylúčená (viac ako 99% spoľahlivosť) a naopak alely DQ2 a DQ8 sú prítomné u viac ako 99% pacientov.
Stanovenie genetickej predispozicie – samotná prítomnosť týchto alel nepotvrdzuje celiakiu, pretože ich má 25-40% zdravej populácie ale  približne len 1% z nich ochorie na celiakiu.

Indikácia vyšetrenia:
• pacienti so suspektnou celiakiou ( zdravotné prejavy, laboratórne výsledky Anti-tTG, Anti-EMA, ani-DGP, celkový IgA)
• rodinní príslušníci pacienta s celiakiou
• pacienti s tráviacimi problémami nejasnej etiológie
Požadovaný odber: 2,5ml periférnej krvi do štandardizovanej skúmavky na krvný obraz (na štítku musí byť EDTA K)
Potreba objednania: nie
Použitá metóda: sekvenovanie SBT, SSP

2.4. Stanovenie krvnej skupiny – AB0 systém

Význam vyšetrenia:
V sporných prípadoch nad rámec bežného sérologického vyšetrenia. Genetickým vyšetrením ABO sa stanoví presný genotypu jedinca s rozlíšením homozygotov a heterozygotov.
Typizácia na úrovni analýzy DNA umožňuje stanoviť krvné skupiny s vysokým rozlíšením. Materiálom pre vyšetrenie môže byť aj tkanivo (napr. pupočník). Vyšetrenie nie je limitované časom od odberu materiálu ani úpravou a skladovaním odobratého materiálu (pupočníkova krv)

Indikácia vyšetrenia:
• novorodenci (nie je u nich ešte úplne rozvinutá expresia antigénov AB0 a na viac sa do ich krvného obehu môžu pasívne preniesť protilátky z matky)
• pacienti po masívnych alebo opakovaných transfúziách cudzích erytrocytov (maskovanie originálneho sérotypu)
• monitorovanie stavu po transplantácii kostnej drene odlišnej krvnej skupiny
• forenzné účely
Požadovaný odber: 2,5ml periférnej krvi do štandardizovanej skúmavky na krvný obraz (na štítku musí byť EDTA K), prípadne tkanivo odobraté do nádoby s fyziologickým roztokom
Potreba objednania: nie
Použitá metóda: SSP, RT-PCR

2.5. Stanovenie RH systému s možnosťou stanovenia Partial D-TYPE , Weak D-TYPE

Význam vyšetrenia:
Genetickým vyšetrením stanovíme presný genotyp. Genetická analýza RH génov (RHD a RHCE) rieši nejednoznačné prípady včítane rozlíšenia typov Weak D a Partial D.
Jedinci s Partial D typom sú imunizovateľní transfúziou erytrocytov s kompletným RhD proteinom preto by mali dostávať krv a krvné preparáty RhD – . Jeho krv je bezpečná pre RhD+ príjemcov. Ak je žena s Partial D tehotná môže vytvárať protilátky.
Pacienti s Weak Typom môžu byť pri rutinnom sérologickom testovaní nesprávne klasifikovaní ako Rh negatívni . Vo všeobecnosti sú považovaní za RhD + a môžu prijímať RhD+ krv, darovaná krv s Weak D typom sa musí klasifikovať ako RhD+ a nesmie sa podať RhD – príjemcovi. Postupy sú závislé aj na stanovenom type Weak D.
Ak je matka RhD – a má dieťa s Weak typom D je zvyčajne považované za RHD+ z hľadiska rizika HDN.

Indikácia vyšetrenia:
• pri zlyhaní štandardných sérologických metódach darcov krvi ale aj príjemcov krvi a krvných derivátov
• tehotné ženy a ich partneri
• novorodenci / pupočníkova krv
• forenzné účely
Požadovaný odber: 2,5ml periférnej krvi do štandardizovanej skúmavky na krvný obraz (na štítku musí byť EDTA K), prípadne tkanivo odobraté do nádoby s fyziologickým roztokom
Potreba objednania: nie
Použitá metóda: SSP, RT-PCR